Was ist ELISA-Mikroplatten-Reader?
Der Mikroplatten-Reader, also der Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ist ein spezielles Instrument für den Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. Tatsächlich handelt es sich um ein spezielles photoelektrisches Kolorimeter oder Spektrophotometer in Verkleidung, und sein grundlegendes Arbeitsprinzip ist im Wesentlichen das gleiche wie der Hauptaufbau und das photoelektrische Kolorimeter. Es kann einfach in zwei Kategorien unterteilt werden, halbautomatisch und vollautomatisch, aber ihre Arbeitsprinzipien sind im Wesentlichen gleich. Sein Herzstück ist ein Kolorimeter, d. h. das kolorimetrische Verfahren wird verwendet, um den Gehalt an Antigen oder Antikörper zu analysieren. Die ELISA-Bestimmung erfordert im Allgemeinen, dass das Endvolumen der Testlösung weniger als 250 μl beträgt, und der Test kann nicht mit einem üblichen photoelektrischen Kolorimeter durchgeführt werden, daher werden besondere Anforderungen an das photoelektrische Kolorimeter im Mikroplatten-Lesegerät gestellt.
Prinzip
Der Mikroplattenleser ist eigentlich ein getarntes photoelektrisches Kolorimeter oder Spektrophotometer für spezielle Zwecke, und sein grundlegendes Arbeitsprinzip ist im Wesentlichen das gleiche wie der Hauptaufbau und das photoelektrische Kolorimeter. Die Abbildung zeigt die Arbeit eines Einkanal-Mikroplattenlesers mit automatischer Probennahme. Schematische Darstellung. Die von der Lichtquellenlampe emittierte Lichtwelle wird durch den Filter oder Monochromator in ein monochromatisches Licht umgewandelt und tritt in die zu prüfende Probe in den mikroporösen Kunststoffpol ein. Ein Teil des monochromatischen Lichts wird von der Probe absorbiert und der andere Teil wird durch die Probe geleitet. Beleuchtet zum Fotodetektor wandelt der Fotodetektor die unterschiedlichen Lichtsignale der zu prüfenden Probe in entsprechende elektrische Signale um. Die elektrischen Signale werden durch Vorverstärkung, logarithmische Verstärkung und Analog-Digital-Wandlung verarbeitet. Betreten Sie den Mikroprozessor für die Datenverarbeitung und Berechnung und zeigen Sie schließlich die Ergebnisse über das Display und den Drucker an. Der Mikroprozessor steuert auch die Bewegung des mechanischen Antriebsmechanismus in X-Richtung und Y-Richtung, um die Mikroplatte durch die Steuerschaltung zu bewegen, um den automatischen Probenerfassungsprozess zu realisieren. Andere Mikroplatten-Lesegeräte verwenden eine manuelle Bewegung der Mikroplatte zum Nachweis, so dass der mechanische Antriebsmechanismus und die Steuerschaltung in X- und Y-Richtung weggelassen werden, so dass das Instrument kleiner und der Aufbau einfacher ist.
Die Mikrotiterplatte ist eine transparente Kunststoffplatte, die speziell zum Auflegen der zu testenden Probe verwendet wird. Die Platte weist mehrere Reihen kleiner Löcher einheitlicher Größe auf, in die das entsprechende Antigen oder der entsprechende Antikörper eingebettet ist. Jedes kleine Loch kann einige zehn Milliliter Lösung aufnehmen.
Licht ist eine elektromagnetische Welle. Die Wellenlänge von 100nm-400nm wird als ultraviolettes Licht bezeichnet, das Licht zwischen 400nm und 780nm kann vom menschlichen Auge wahrgenommen werden und die Wellenlänge größer als 780nm wird als Infrarotlicht bezeichnet. Menschen können Farben nur sehen, weil das Licht auf das Objekt trifft und vom Objekt zurückreflektiert wird. Grüne Pflanzen sind grün, weil die meisten Pflanzen rot-oranges Licht und blau-violettes Licht absorbieren, aber sie absorbieren und reflektieren kein Grün, sodass Pflanzen grün erscheinen. Das Prinzip der Mikroplatten-Reader-Messung besteht darin, die Extinktion des Analyten bei einer bestimmten Wellenlänge zu detektieren.
Struktur
Es gibt 40-Well-Platten, 55-Well-Platten, 96-Well-Platten und so weiter. Unterschiedliche Instrumente verwenden unterschiedliche Messblenden, die einzeln oder Reihe für Reihe getestet werden können.
Das vom Mikroplatten-Lesegerät verwendete monochromatische Licht kann entweder durch einen kohärenten Filter oder denselben Monochromator wie ein Spektrophotometer erhalten werden. Bei der Verwendung eines Filters als Filtergerät ist es dasselbe wie bei einem gewöhnlichen Kolorimeter. Es kann vor der Mikrotiterplatte oder hinter der Mikrotiterplatte platziert werden. Nach dem Kondensor erreicht die Blende den Reflektor, wird vom Reflektor um 90° reflektiert und durchquert die kolorimetrische Lösung vertikal und wird dann durch den Filter geschickt. Zur Fotozelle.
Aus dem Arbeitsblockdiagramm und dem Lichtwegdiagramm des Mikroplatten-Readers ist ersichtlich, dass es die folgenden Unterschiede zu herkömmlichen photoelektrischen Kolorimetern aufweist:
(L) Der Behälter für die zu testende kolorimetrische Lösung verwendet keine Küvette mehr, sondern eine Mikrotiterplatte aus Kunststoff. Die Mikrotiterplatte besteht normalerweise aus transparentem Polyethylenmaterial, das eine starke Adsorptionswirkung auf Antigen und Antikörper hat, und wird daher als Festphasenträger verwendet.
⑵Da die Kunststoff-Mikrotiterplatte mit der Probe mehrreihig porös ist, kann das Licht nur vertikal passieren, sodass der Lichtstrahl des Mikroplatten-Readers die zu testende Lösung und die Mikroplatte vertikal durchdringt. Der Lichtstrahl kann von oben nach unten verlaufen oder von unten nach oben durch die kolorimetrische Flüssigkeit gehen.
⑶ Mikroplatten-Reader verwenden normalerweise nicht nur A, sondern manchmal auch die optische Dichte OD, um die Extinktion auszudrücken. Mikroplatten-Reader können in zwei Typen unterteilt werden: Einkanal- und Mehrkanal-Reader, und Einkanal-Reader werden in zwei Typen unterteilt: automatisch und manuell. Automatischer Gerätetyp Es gibt einen mechanischen Antriebsmechanismus in X- und Y-Richtung, der die kleinen Löcher der Mikrotiterplatte L nacheinander zum Testen unter den Strahl schicken kann, und der manuelle Typ nutzt die manuelle Bewegung der Mikrotiterplatte zum Messen.
Auf Basis des Einkanal-Mikroplatten-Readers wurde ein Mehrkanal-Mikroplatten-Reader entwickelt. Diese Art von Mikroplattenlesegerät ist im Allgemeinen automatisiert. Es hat keine Mehrfachstrahlen und Mehrfach-Photodetektoren, wie ein 12-Kanal-Instrument mit 12 Strahlen oder 12 Lichtquellen, 12 Detektoren und 12 Verstärkern, unter der Wirkung der mechanischen Antriebsvorrichtung in X-Richtung werden 12 Proben in a erfasst Reihe. Die Erkennungsgeschwindigkeit des Mehrkanal-Mikroplatten-Readers ist schnell, aber seine Struktur Komplexere Preise sind auch höher.
Anwendungsbereich des Mikroplatten-Readers
Hämatologietest Thrombozytenassoziierter Antikörpertest PAIgA, PAIgG, PAIgM
Bestimmung von D-Dimer D-Dimer
Bestimmung von Serumfibrinabbauprodukten FDP
Bestimmung von T3, T4 mit Trijodthyronin und Tetrajodthyronin
Immunologischer Test C-reaktives Protein Bestimmung CRP
Bestimmung von Immunglobulin IgD, IgE
Bestimmung der zirkulierenden Immunkomplexe CIC
Bestimmung von Rheumafaktor IgG, IgA, IgM RF
Anti-Thyreoglobulin-Antikörper, mikrosomale Antikörperbestimmung TG, TM
Immunologischer Nachweis von Tumorkrebs Alpha-Fetoprotein-Bestimmung AFP
Bestimmung des karzinoembryonalen Antigens CEA
Bestimmung des Prostata-spezifischen Antigens PSA
Bestimmung von Bauchspeicheldrüsenkrebs, Gallenwegskrebs, Magenkrebs CA19-9
Bestimmung von Eierstockkrebs CA125
Bestimmung von Brustkrebs CA15-3
Bestimmung des zervikalen Plattenepithelkarzinoms SCC
Nachweis von multiplem Knochenmarkkrebs
Bestimmung von Schilddrüsenkrebs hTG
Immunologischer Test auf Infektionskrankheiten, Hepatitis A serologischer Test, Anti-HAV-IgM
Hepatitis-B-Serologietest Zweieinhalb Paare
Hepatitis-C-Serologie-Nachweis Anti-HAV-IgG, Anti-HCV-IgM
Serologischer Nachweis von Hepatitis D Anti-HDV-IgG, Anti-HDV-IgM
Serologischer Nachweis von Hepatitis E Anti-HEV-IgG
Nachweis von Antikörpern gegen hämorrhagisches Fieber mit Nierensyndrom HFRS-IgG
Nachweis des Japanischen-Enzephalitis-Virus-Antikörpers IgM
Nachweis von Antikörpern gegen das humane Immunschwächevirus (dh regionales AIDS) HIV β 2 M
Schwangerschafts- und Wochenbett-Funktionstest Toxoplasma-Virus-Test TOXO
Rötelnvirus-Erkennung RV
Cytomegalovirus-Nachweis CMV
Nachweis des Herpes-simplex-Virus Anti-HSV (Ⅰ, Ⅱ)
Andere können auch Gentests und Tierrückstände, Prüfgegenstände für Pestizidrückstände usw. durchführen.
